图片桥接软件在荧光法检测自身抗体中的应用效
【关键词】:
【摘 要】:自身抗体是一类针对自身组织、器官、细胞及细胞成分的抗体[1],自身免疫性疾病(AID)是指由于某些原因造成免疫系统对自身成分的免疫耐受减低或破坏,致使自身抗体或/和致敏淋巴细
自身抗体是一类针对自身组织、器官、细胞及细胞成分的抗体[1],自身免疫性疾病(AID)是指由于某些原因造成免疫系统对自身成分的免疫耐受减低或破坏,致使自身抗体或/和致敏淋巴细胞损伤自身器官组织而引起的疾病,表现为相应组织器官的功能障碍[2-4]。自身抗体不仅在AID诊断及疗效观察中具有重要的价值[5],还可见于肿瘤和感染等疾病[6-8],随着其应用范围的扩大目前各大医院都开展了自身抗体的检测,其中抗核抗体(ANA)是目前临床最常见的检测项目。ANA是指针对自身真核细胞的细胞核或细胞质中的蛋白和核酸等成分的自身抗体的总称,是AID诊断的重要标志物[9-10]。间接免疫荧光法(IIF)是检测ANA的推荐方法[11],目前,该方法已经实现半自动化,前期检测样本的荧光生物载片由仪器完成,后期的结果需由人工进行判读。近5年来,四川大学华西医院不断创新,优化荧光法检测自身抗体的流程,经历了3种方法的流程改进即:人工镜检,人工图检,软件图检。本研究通过对不同方法的在时间效率上进行比较分析,探讨不同检测流程的方法一致性、重复性,对新开发的软件进行应用效果的评价,为图片桥接软件代替传统人工录入法提供实验依据,现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1一般资料 目前我国大部分三甲医院普遍开展ANA项目,据不完全统计,大约每次检测在150例左右,为此笔者以其平均日常样本量为基准进行效果比对评价,收集四川大学华西医院2018年11月13日当天门诊及住院患者检测ANA项目样本150例。
1.1.1试剂 采用德国欧蒙ANA检测试剂盒,采用 HEp-2 (人喉癌上皮细胞株) 及猴肝组织切片为抗原底物的IIF检测。
1.1.2仪器 采用德国欧蒙全自动荧光免疫检测仪(Sprinter XL)进行样本处理,德国欧蒙全自动荧光判读仪(EUROPattern)进行图像采集。荧光显微镜为德国欧蒙EUROStar Ⅲ Plus型。
1.1.3分析软件 自主开发的实验室图片桥接软件分析系统。
1.2方法 将150例样本进行离心编号,将样本按顺序放入SprinterXL,同时按仪器要求放入ANA荧光生物载片,仪器按照已设定好的ANA检测流程对样本进行处理,完成后进行人工封片。再分别用人工镜检、人工图检、软件图检3种方法对生物载片进行阅片并报告结果,ANA的结果报告包括滴度和核型。
1.2.1人工镜检 人工通过荧光显微镜阅片,并对结果做好纸质记录,最后将结果手工录入实验室信息系统(LIS)。
1.2.2人工图检 全自动荧光判读仪采集图片,人工通过对采集的图片进行判读并对结果做好纸质记录,最后将结果信息录入LIS系统。
1.2.3软件图检 全自动荧光判读仪采集图片,人工通过对采集的图片判读并将结果代码录入图片桥接软件,信息录入完成后点击发送即传入LIS。
1.2.4操作人员体验评分方法 通过8位实验操作人员对3种方法的体验进行评分,总分为10分,分数越高,表示越轻松。
1.2.5统计学处理 采用SPSS21.0进行统计学分析,采用Kappa一致性检验分析不同检测方法一致性,Kappa>0.8提示方法之间具有较好的一致性,以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结 果
2.13种方法试验过程耗时的比较 见表1。
表13种方法试验耗时的比较(min)组别阅片耗时(A)判读耗时(B)录入LIS耗时(C)人工操作耗时(总)与软件图检耗时的差值人工镜检+30人工图检+18软件图检-
表2人工镜检重复性情况方法人工镜检(第一次)-±+合计人工镜检(第二次)-±+0合计
2.2人工镜检与软件图检的重复性
2.2.1人工镜检的重复性 采用不同时间对同一批150例样本进行人工镜检,两次结果的重复性见表2。人工镜检的重复性为90.7%(136/150),Kappa=0.852,P<0.001。
2.2.2软件图检的重复性 采用不同时间对同一批150例样本进行软件图检,两次结果的重复性结果见表3。
表3软件图检的重复性情况方法软件图检(第一次)-±+合计软件图检(第二次)-±+0合计
2.2.3人工镜检与软件图检的结果一致性分析 将人工镜检和软件图检结果采用Kappa一致性检验分析,其中对图检或镜检中重复检测结果不一致的样本,采取就“高”原则(即若2次重复检测结果分别为“阴性”和“阳性”,认定检测结果为“阳性”),两种方法Kappa值为0.957(P<0.001)。具体结果见表4。
表4人工镜检与软件图检的一致性情况方法人工镜检-±+合计软件图检-±0+006666合计
2.33种检测方法的特点比较 见表5。
表53种检测方法的特点比较情况项目自动校验(ANA相关诊断)自动校验(ANA的相关项目)图片保存(永久回看)查看历次结果特殊核型标注滴度信息交互结果实时传入LIS滴度汇总报表拓展学习(标准图谱、PPT、教学视频等)人工镜检×××××××××人工图检××√××××××软件图检√√√√√√√√√