文章摘要:【目的】Raf激酶是调控细胞增殖、分泌和运动的重要蛋白激酶，参与多种生命活动。研究Raf激酶基因（raf）的结构特征和表达模式，以探究其在美丽硬仆骨舌鱼（Scleropages formosus）中的功能。【方法】本研究通过RACE技术克隆了美丽硬仆骨舌鱼raf基因cDNA序列（GenBank登录号MW679580）并进行生物信息学分析；用荧光定量PCR检测raf在精巢等8个组织内的表达模式；通过构建原核表达载体诱导美丽硬仆骨舌鱼raf融合蛋白。【结果】美丽硬仆骨舌鱼raf序列全长3747bp，开放阅读框（ORF）为1827bp，编码609个氨基酸。生物信息学分析显示，Raf蛋白的分子量为68.8kD，等电点PI为9.45，含有1个Ras结合域，1个蛋白激酶C保守区（C1）结构域，1个低合成复杂度区域和1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域，是亲水性跨膜蛋白。序列同源性分析显示，美丽硬仆骨舌鱼raf编码蛋白序列与雀鳝相似度最高，为84.28%。美丽硬仆骨舌鱼与雀鳝都是较早分化出的物种，序列同源性分析与两者进化地位相符。用荧光定量PCR检测raf在8个组织内的表达量，结果表明，raf基因在美丽硬仆骨舌鱼多种组织中均有表达，其中在精巢和肝中的表达量最高，其次是脾和头肾。精巢和肝中的表达量显著高于卵巢、鳃、心脏和脑组织（P＜0.05）。构建pET-B2m-raf原核表达载体，通过0.1 mmol/L IPTG诱导，成功获得融合蛋白，经SDS-PAGE检测，其分子量符合预期。【结论】raf在美丽硬仆骨舌鱼精巢和肝脏中的表达量较高，推测其可能在精巢发育和免疫机能调控中发挥作用，构建原核表达载体并成功诱导出重组蛋白，为进一步研究raf在美丽硬仆骨舌鱼体内的生物功能奠定基础。

文章关键词:美丽硬仆骨舌鱼,raf基因,组织表达,生物信息学分析,原核表达,

论文作者:刘奕¹ 杨叶欣¹ 刘超¹ 汪学杰¹ 牟希东¹ 

作者单位:2. 广东省水产动物免疫技术重点实验室 

论文分类号: S917.4